一、?概述
鬼峰是液相色譜中最常出現(xiàn)的問題之一,在做液相色譜反相系統(tǒng)梯度分析時,有時會遇到儀器不進(jìn)樣,也有出峰的情況;同樣的條件,有時出現(xiàn)異常色譜峰,這種峰神出鬼沒,變幻莫測,所以被稱為鬼峰。
鬼峰來源多種多樣,其主要來源可分為以下2個方面:
(1)流動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì),當(dāng)梯度開始時由于有機(jī)相比例不高,洗脫能力不強(qiáng),雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集,隨著流動相比例變化,洗脫能力增強(qiáng),富集的雜質(zhì)被洗脫,從而形成鬼峰。
(2)流動相脫氣不完全,殘留氣泡??諝庠谟袡C(jī)相和水中的溶解度不同,當(dāng)水和有機(jī)相混合時,氣泡就產(chǎn)生了。
鬼峰的危害:
1、污染儀器
2、對樣品成分誤判斷
3、與目標(biāo)峰重疊,影響分離度
4、增加工作量要做更多的驗(yàn)證工作去判定這個物質(zhì)是否是目標(biāo)物質(zhì)
反相色譜梯度分析時,使用恒譜生鬼峰捕集柱能夠去除溶劑包括有機(jī)溶劑中的雜質(zhì),對弱極性和非極性的有機(jī)雜質(zhì)有強(qiáng)烈吸附,有效的消除污染物,減少鬼峰出現(xiàn)的幾率,延長色譜柱和儀器的壽命。
二、?鬼峰搜集去除柱的安裝
鬼峰捕集去除柱保存在純甲醇中,使用前采用純甲醇1ml/min流速沖洗20min(注意:不要連接色譜柱和檢測器進(jìn)行沖洗),沖洗好后卸下小柱,按照示意圖安裝位置,連接到混合器與進(jìn)樣器之間。(安裝時注意進(jìn)出方向)
下面實(shí)例表明,將恒譜生鬼峰去除小柱安裝在混合器之后可以有效捕集流動相引進(jìn)的雜質(zhì)。
色譜條件:
色譜柱:USHA-?C18 4.6*250mm 5um
流速:1.0ml/min?????進(jìn)樣量:20ul????柱溫:40度????檢測波長:210nm
樣品:高純水????流動相A:高純水????流動相B:乙腈
運(yùn)行梯度:
時間(min) |
流動相A(%) |
流動相B(%) |
0 |
90 |
10 |
20 |
10 |
90 |
30 |
10 |
90 |
使用前
使用后
鬼峰來源:
1.儀器中的雜質(zhì)
2.樣品中的雜質(zhì)
3.流動相中的雜質(zhì)
4.進(jìn)樣口稀釋液與流動相極性/PH相差太大
5.流動相殘留氣泡
6.儀器系統(tǒng)時間較久
其中主要來源于流動相和管路,如:有機(jī)相中污染物,水相中污染物,緩沖鹽,流動相瓶和混合過程產(chǎn)生等等。