??????? 本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完美的協議適合每一種分離目的。因此，建議為您的特定應用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測試，您將輕松純化您正在尋找的組件。
??????? 一、快速液相色譜純化
??????? 使用快速色譜法進行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低?？焖僖合嗌V柱使用更大的粒徑和柱容量，允許使用更多的起始材料，但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度，或者如果下一步將進行 HPLC，這可能是您的選擇。
??????? 1、確定溶劑系統(tǒng)
??????? 樣品的純度（即混合物中有多少化合物）可以使用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對極性進行定性測定。使用 TLC 預先篩選最佳流動相和固定相將節(jié)省時間和金錢。根據所使用的溶劑，您可能需要在通風柜中運行色譜柱，因為存在潛在的危險煙霧。
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??????? 2、確定要使用的列
??????? 選擇分離柱時要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說，快速液相色譜柱的最大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數量的色譜柱，但如果您沒有那么多起始材料，那么您只會在硅膠和額外的溶劑上浪費金錢來運行這些大型色譜柱。在確定液相分析柱、基質和溶劑后，您就可以進行快速分離了。
??????? 3、液相色譜柱
??????? 無論您是自己裝柱還是購買一根預裝柱，按重量計算硅膠與化合物的比例（即硅膠：化合物）都將幫助您實現更有效的分離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱，像uHPLCs高效液相C18-AQ分析柱對親水性和極性化合物具有更強的保留能力和選擇性。
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??????? 如果包含了分離不太復雜的溶液需要 30:1 到 50:1 的比率，但更復雜的分離可能需要高達 120:1 的比率。手動運行色譜柱時，切勿讓溶劑管線低于硅膠，否則氣孔會在硅膠上形成看起來像裂縫的長線。這大大降低了分離的效率。
???????? 二、HPLC純化
?????? 在 HPLC 上運行樣品相當簡單，因為在快速液相色譜柱上預純化過程中確定的許多參數都可以應用于此過程。如果您在沒有預純化步驟的情況下運行 HPLC 分離，請考慮使用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 方法。使用 HPLC 時的另一個考慮因素是計算的背壓。由于 HPLC 色譜柱的粒徑更小，可實現更高質量的分離，因此這些系統(tǒng)往往在高壓條件下運行，而閃蒸分離的壓力相對較低。使用有關粒徑和形狀、色譜柱內徑和溶劑規(guī)格的信息計算估計的背壓。
??????? 最后，與恒譜生技術支持專家進行簡短討論可以節(jié)省您寶貴的時間，并使您能夠在瞬間分離化合物！
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發(fā)布于: 2022-04-08