??????? 首次將 UHPLC 用于小分子分離時，能得到很好的峰形，但是蛋白質(zhì)峰的分離幾乎沒有那么好，因此通常不可能顯著縮短運行時間。然而，最近對蛋白質(zhì)進一步改進讓UHPLC 可以提供更好的分離度和更短的運行時間。雖然 UHPLC 不能讓科學家始終看到蛋白質(zhì)之間的所有差異，但它可以讓他們看到一些差異——例如，在大體形態(tài)、二硫化物異構(gòu)體、脫氨基作用和蛋白質(zhì)折疊方面。蛋白質(zhì)研究人員使用不同的色譜模式來實現(xiàn)這一目標，例如反相色譜 ( RPC )、離子交換 色譜( IEX ) 和尺寸排阻 ( SEC ) 色譜。
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??????? 為了成功分離出蛋白質(zhì)的細微變化，可以通過儀器控制在儲存和分離過程中具有生物相容性和準確的溫度控制來保護脆弱的蛋白質(zhì)樣品免受外部因素的影響。許多蛋白質(zhì)研究人員在質(zhì)譜 ( MS ) 分析之前使用超高效液相色譜技術(shù)分離蛋白質(zhì)。這可以很好地工作，具體取決于 UHPLC 分析的模式。
??????? 色譜填料改進的粒子技術(shù)也對提高蛋白質(zhì)分析有著顯著推進作用。傳統(tǒng)上，UHPLC 對小分子的定義特征是直徑小于 2 微米的全多孔顆粒柱。但是，這些對較大的蛋白質(zhì)效果不佳，因為它們會導(dǎo)致背壓增加、液相色譜柱堵塞和其他儀器維護問題。對于這個問題，改進的色譜填料采用核殼顆粒（也稱為表面多孔、幾何結(jié)構(gòu)、融合核或混合顆粒）由被多孔外層包圍的實心球形內(nèi)層制成，可提高 UHPLC 的分離效率處理更大的蛋白質(zhì)。
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??????? 恒譜生USHA和USHB系列填料從1.8粒徑到200、300甚至更大的粒徑都具有很好的重現(xiàn)性、選擇性和高分離度的優(yōu)點。獨有的鍵合方式，可實現(xiàn)100%水相條件。不管是反相分析還是正相分析，都可以找到合適的色譜柱，能夠高效分析維生、類固醇、蛋白質(zhì)、單糖、多糖、氨基酸等多種物質(zhì)。
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??????? UHPLC 的應(yīng)用正在擴大，并且越來越多地包括生物治療藥物。核殼顆粒通常用于分離免疫球蛋白， IgG 療法是當今蛋白質(zhì)治療工作的最大份額。未來可能超高效液相色譜會在核殼顆粒以及研究和生物制藥應(yīng)用方面取得進一步的技術(shù)發(fā)展。作為化學和生物學的交叉點，用于蛋白質(zhì)的 UHPLC 已準備好進入一系列有趣的應(yīng)用領(lǐng)域。
發(fā)布于: 2022-02-25